Determinación de la concentración espermática de un eyaculado

La concentración espermática de un eyaculado se define como el número de espermatozoides por unidad de volumen de dicho eyaculado. El cálculo de la concentración espermática es un punto clave en un CIA puesto que va a determinar, junto con el volumen del eyaculado, el número de dosis a realizar. Una incorrecta medida de la concentración dará lugar a una disminución del rendimiento del centro o a la elaboración de dosis con una concentración inferior a la deseada.
Actualmente, los CIA producen al menos dos tipos de dosis, para inseminación cervical (dosis de 80-100 ml) o dosis para inseminación post-cervical (dosis de 30-60 ml), por lo que la precisión en el análisis de la concentración es todavía más relevante, especialmente para la inseminación post-cervical, ya que se utiliza un menor número de espermatozoides. En cualquiera de estos casos, el número de espermatozoides utilizados durante la IA se ha reducido, por lo que una correcta preparación de las dosis es de vital importancia para mantener unos datos de fertilidad adecuados en las granjas.
Los diferentes métodos y aparatos de medida de la concentración espermática presentan variaciones en su precisión, reproducibilidad, rango de medida, coste, etc. Por ello cada centro o granja deberá escoger la metodología que mejor se adapte a sus necesidades. Estos métodos se pueden clasificar en directos, que son aquellos que realizan un contaje directo de los espermatozoides, o indirectos, que realizan una estimación de la concentración a partir de la medida de otro parámetro como el color, la turbidez o la opacidad.

Cámara de Bürker

La cámara de Bürker permite una cuantificación directa de los espermatozoides de una muestra y es el método más tradicional y económico utilizado para la medida de la concentración seminal. Sin embargo, presenta desventajas debido a su laboriosidad y a su falta de exactitud, que en muchos casos genera resultados inconsistentes y con altos coeficientes de variación (de hasta un 20%).

Colorimetría

Este método indirecto se basa en la determinación de la cantidad de luz absorbida por una muestra (absorbancia) con un colorímetro, cuya célula fotoeléctrica reacciona al paso de la luz a través de una cubeta con la muestra de eyaculado. El cálculo de la concentración se estima por la correlación que existe entre el número de espermatozoides por unidad de volumen con la densidad óptica de la muestra. Dicha correlación permite la construcción de una recta patrón que debe ser construida con otro método de media de la concentración, preferiblemente el Nucleocounter.
Una vez obtenida la recta patrón, la colorimetría es un método rápido con un bajo coeficiente de variación, pero es necesario tener en cuenta que la medida de la absorbancia se ve afectada por la presencia en la muestra de células no espermáticas, bacterias y por la aglutinación del semen. La exactitud de la medida de concentración por el método colorimétrico depende fundamentalmente de la fiabilidad curva obtenida y de realizar una dilución del eyaculado que permita obtener datos de absorbancia dentro del rango óptimo de lectura del equipo.

Nucleocounter

El Nucleocounter es un contador de células que integra un microscopio de fluorescencia con un software de análisis de imagen que permite determinar de manera muy precisa y sencilla la concentración espermática. Para la realización de la medida es necesario realizar una dilución previa del eyaculado en un medio rompe las membranas de los espermatozoides exponiendo su ADN al yoduro de propidio (fluorocromo con afinidad por los ácidos nucleicos). El equipo emite sobre la muestra luz verde que hace que el ADN unido al yoduro de propidio emita una luz fluorescente detectada por el sistema. El software discrimina entre las señales luminosas emitidas por os espermatozoides de las procedentes de otras células. El resultado se ofrece en millones de espermatozoides/ml.
El Nucleoconter es actualmente, junto con la citometría de flujo, el método más fiable para la determinación de la concentración espermática tanto de eyaculados como de dosis seminales. Adicionalmente el Nucleocounter permite determinar la viabilidad de los espermatozoides de manera muy rápida y sencilla.

Recomendaciones generales

  • Al extraer una muestra para su valoración, es muy importante homogeneizar correctamente el eyaculado puesto que la rápida velocidad de sedimentación de los espermatozoides puede originar errores importantes en los resultados finales.
  • Es fundamental conocer la técnica correcta de pipeteo y utilizar pipetas calibradas y en buen estado.
  • Una manera sencilla de evaluar nuestro método de medida de la concentración es volver a analizar la concentración del semen ya diluido antes de envasarlo, pero esta vez con un instrumento de medida diferente.

Cálculo de la concentración seminal usando Cámara Bürker

Material necesario:

  • Un envase graduado de 100 ml.
  • Solución de contaje: citrato de sodio (3,4%) tratada con formol.
  • Micropipeta automática de 1 ml con puntas de un solo uso.
  • Cámara de Bürker.

Realizar una solución de 100 ml:

  • 1 ml de semen puro.
  • 99 ml de solución de contaje.
  • Agitar el frasco y depositar una gota sobre la cámara de recuento.

Recuento de espermatozoides:

Contar los espermatozoides que hay en 40 cuadrados pequeños de dos cuadrículas. Computar tan sólo aquellos espermatozoides con las cabezas dentro del cuadrado, en contacto con la línea superior y la izquierda y dos esquinas. El número elegido será la media de las 4 series de 40 cuadrados.

 

Cálculo de número de espermatozoides en cámara Bürker (concentración útil)

                                          A x 10x V         A x V

Nº de dosis (N) =    —————– = ———–

3 x 10^9          300

V = Volumen del eyaculado en cc
A = Número de espermatozoides contados en 40 cuadros (0,01 mm3)

Número total de espermatozoides en el eyaculado:

        • en 1 mm= A x 100
        • en 1 cc = (A x 100) x 1.000
        • en semen puro (dilución  (A x 100) x 1.000 x 100 = A x 1072520-camara-burker-cubre011
        • Espermatozoides totales en el eyaculado = A x 10x V

Cantidad de diluyente a añadir  (dosis seminales de 100 cc):

  • N x 100 = Volumen total (Diluyente + Eyaculado)
  • N x 100 – V = Volumen de Diluyente a añadir

Dilución recomendada 1/10 – 1/25