公猪原精浓度的测定

主要是测定每单位体积的精子数。可以通过不同的仪器来进行测定,其中最常见的就是光电比色计和精子计数器。

光电比色计测定

使用分光光度计或光电比色计来测定精液浓度的方法广泛应用于大型的人工授精中心。这种方法是基于每单位体积的精子数与精液的不透明度之间的关联性。然而,该方法不足的是,由于精浆中含有的蛋白质的浓度是高度可变的,因此会导致精浆中的不可预测的乳白光对测定出的精液浓度有影响并会呈现一定的误差。该光电比色计应定期校准,以避免仪器的不精准。

光电比色计的校准

该光电比色计包含一个光电检测器,可以检测到穿过比色管的光线,从而测量出精液样品的不同的光密度。这使我们能够建立一个曲线图案,可以表明其中吸光度/透光率与不同的精子浓度值之间的对应关系。比色计上直接读出吸光度,对照精子计数板上测出的精液浓度数值。

一旦校准准确,光电比色计提供了一种测定精子浓度的快速方法

该比色测定法是通过读出稀释精液样本的吸光度同柠檬酸钠校准液对比进而评估出精子细胞的浓度。

校准溶液

  • 柠檬酸钠:3.46g
  • 蒸馏水:100ml

选择560纳米波长滤波器(在540和570纳米之间)。放置好带有校准溶液的比色管,并将仪器的吸光度设置为0。

校正曲线

通过对原精进行的连续稀释,与由精子计数板测定出的起始浓度点获得的图案曲线。不同的吸光度读数制成曲线图案。

另一种方式来构造的曲线,是用光电比色计测量15或者20份不同原精精液的吸光度,它的浓度是已知的,经由精子计数板测定过的,从而绘制校准曲线。

精子计数板测定

精子计数板测定法是在农场的人工授精中心使用比较多的方法,由于他的简单性和可操作性。

测定步骤如下:

  1. 充分混合原精精液,之后使用移液器取出1ml纯精。
  2. 与3%的福尔马林盐溶液以1:100进行稀释,可使用100cc的量瓶。
  3. 轻轻的混合溶液,使用下述方法滴一滴精液到计数板的腔室里
    • 盖好腔室的盖玻片
    • 将移液器放置在腔室和盖玻片之间,使得精液自然进入到标线的位置。
    • 使用放大倍数为40倍的物镜显微镜下观察
  4. 变换40个平场观察并对精子进行计数。

我们将计数头部都在小盒子的网格内的那些精子,和那些头部在上方和右边的精子,和小盒子顶部和底部角落处的精子。总是相同的两个侧面和盒子的两个角部。

每立方毫米(C)的精子的浓度等于精子计数的总和(A)×10,000 =(C)